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          常见问题

          • 1. 如何制备常用培养基

            培养基制备(按1000ml计)
            1、 营养肉汤(Nutrient broth)培养基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,加水至1000ml,pH7.2~7.4
            2、 营养琼脂培养基(Nutrient agar)培养基: 牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,琼脂15~20g,加水至1000ml,pH7.2~7.4
            3、 肉汁葡萄糖培养基: 牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,葡萄糖20g,琼脂15~20g,,pH7.2~7.4
            4、 察氏培养基:NaNO32g,K2HPO4 1g,KCl 0.5g,MgSO4·7H2O 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,蔗糖30g, 琼脂15~20g,加水至1000ml,pH自然
            5、 高氏一号培养基:可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCl 0.5g, K2HPO4 0.5g, MgSO4·7H2O0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g, 琼脂20g,加水至1000ml,pH7.2~7.4。此培养基适用于多数放线菌,孢子生长良好,宜保藏菌种。制法:先用少量冷水将淀粉调成糊状,再取700ml水盛于烧杯中,在电炉上加热,沸腾时边搅拌边将淀粉糊倒入,待透明后再将其他成分加入,最后补足水分至1000ml.
            6、 无碳基础培养基(NH4)2SO4 5g,KH2PO4 1g,NaCl 0.1g, MgSO4·7H2O 0.5g,CaCl2 0.1g,酵母膏0.2g, 加蒸馏水至1000ml,pH6.5.加2%水洗琼脂即成固体培养基.于6.86×104Pa压力下灭菌20min.此培养基适用于测定酵母菌对碳源的利用(加待测碳源2%).
            7、 无氮基础培养基:葡萄糖20g, K2HPO4 1g, MgSO4·7H2O 0.5g,酵母膏 0.1g或20%豆芽汁20ml,水洗琼脂20g,加无氨蒸馏水至1000ml.pH6.5. 于6.86×104Pa压力下灭菌20min.此培养基适用于测定酵母菌对氮源的利用(加待测氮源0.5%).
            8、 营养缺陷型筛选用培养基
            ⑴ 普通营养肉汤培养基
            ⑵ 加倍营养肉汤培养基: 牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,加水至500ml,pH7.2
            ⑶ Vogel 50×(即浓缩50倍): MgSO4·7H2O 10g,柠檬酸100g,NaNH4HPO4·4H2O175g,KH2PO4·2H2O599.88g,K2HPO4·3H2O656.31g,加蒸馏水至1000ml.配置时先加水500ml,加热使药品溶解后,再定容1000ml.配好后放入冰箱备用.
            ⑷ 固体基本培养基:Vogel 50×20ml,葡萄糖20g,水洗琼脂20g,加蒸馏水至1000ml,pH7.0,
            ⑸ 2氮液体基本培养基:K2HPO47g,KH2PO4 3g,柠檬酸纳·3H2O 5g,MgSO4·7H2O 0.1g,(NH4)2SO4 2g,葡萄糖20g,加蒸馏水至1000ml,pH7.0, 于4.9×104Pa压力下灭菌20~30min.
            ⑹ 无氮液体基本培养基:在⑸的配方中除去(NH4)2SO4即可.
            ⑺ 混合氨基酸和混合维生素的配置:将氨基酸分为七组(如下表),其中六组各有6种氨基酸,每种氨基酸等量研细,充分混匀.若所选的氨基酸为DL型,则用量加倍.第七组只有一中氨基酸.第八组为混合维生素.
            Ⅰ 赖氨酸 精氨酸 甲硫氨酸 半胱氨酸 胱氨酸 嘌呤
            Ⅱ 组氨酸 精氨酸 苏氨酸 谷氨酸 天冬氨酸 嘧啶
            Ⅲ 丙氨酸 甲硫氨酸 苏氨酸 羟脯氨酸 甘氨酸 丝氨酸
            Ⅳ 亮氨酸 半胱氨酸 谷氨酸 羟脯氨酸 异亮氨酸 缬氨酸
            Ⅴ 苯丙氨酸 胱氨酸 天冬氨酸 甘氨酸 异亮氨酸
            Ⅵ 色氨酸 嘌呤 嘧啶 丝氨酸 缬氨酸 酪氨酸
            Ⅶ 脯氨酸
            Ⅷ 维生素B1 维生素B2 维生素B6 泛酸 对氨基苯甲酸 烟碱酸及生物素
            因脯氨酸容易潮解,所以单独列为第七组.
            把维生素B1、B2、B6、泛酸、对氨基苯甲酸(BAPA)、烟碱酸及生物素等量研细,充分混匀,配成混合维生素为第八组。

          • 2. 溶氧电极长期不用如何保存

            1、探头较长时间不用时应将保护帽套好,放置在空气中保存。

          • 3. PH电极长期不用如何保存

            1、电极较长时间不用时应按说明书要求保存在合适的液体中。
            2、电极不能长期干放。干放的电极应先放在3MHCl(或饱和KCl)中活化后才能使用。
            3、电极不可放在蒸馏水中保存。

          • 4. 注意事项

            1、 罐体灭菌前务必检查其中液面高度,要求所有的电极都没于液面以下。
            2、打开发酵罐电源前务必检查冷却水是否已打开,温度探头是否已插入槽中,否则会烧坏加热电路。
            3、发酵过程中一定要保持工作台的清洁,用过的培养瓶及其它物品及时清理,因故溅出的酸碱液或水应立即擦干。
            4、 对罐体安装,拆卸和灭菌时要特别小心pH电极和罐体的易损又昂贵部件。

          • 5. 发酵罐维护保养

            1、如进气管与出水管接头漏气,当旋紧接头不解决问题时,应添加或更换填料。
            2、压力表与安全阀应定期检查,如有故障要及时调换或修理。
            3、清洗发酵罐 时,请用软毛刷进行刷洗,不要用硬器刮擦,以免损伤发酵罐表面。
            4、配套仪表应每年校验一次,以确保正常使用。
            5、电器、仪表、传感器等电气设备严禁直接与水、汽接触,防止受潮。
            6、设备停止使用时,应及时清洗干净,排尽发酵罐及各管道中的余水;松开发酵罐罐盖及手孔螺丝,防止密封圈产生永久变形。
            7、操作平台、恒温水箱等碳钢设备应定期(一年一次)刷油漆,防止锈蚀。
            8、经常检查减速器油位,如润滑油不够,需及时增加。
            9、定期更换减速器润滑油,以延长其使用寿命。
            10、如果发酵罐暂时不用,则需对发酵罐进行空消,并排尽罐内及各管道内的余水。

          • 6. 发酵罐使用方法

            1、校正pH电极和溶氧电极。

            2、罐体灭菌。根据需要将培养基配入罐体,按要求封好后,小型发酵罐(5L)可将罐体放入大灭菌锅灭菌(115℃,30分钟);大中型发酵罐(10L及以上)采用蒸汽灭菌(121℃,30min)。

            3、待罐体冷却后,将其置于发酵台上,安装完好;打开冷却水,打开气泵电源,连接通气管道开始通气,调节进气旋钮使通气量适当,使罐压保持在0.05MPa;设置温度、pH、搅拌速度等,并在确定的转速和通气量下对溶氧电极进行斜率标定,数值为100%

            4、待温度稳定,各项参数都正确后,将预摇好的种子接入,开始发酵计时,并开始记录各种参数。

            5、发酵完毕后清洗罐体和电极,将pH电极插入有3M氯化钾的三角瓶中待用,溶氧电极的探头用保护套套好,保存备用。

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